Menstrual blood-derived cell

Cell culture
　細かく採取のところを記載する。
　注意事項ならびに採取方法を英訳して図にも入れよう。

Characterization

Gene chip analysis
Methylation
Karyotype and CGH
Sugar lectin analysis

Differentiation

採取方法

※ 月経血は、できれば月経初日～３日目の間に採取して下さい。３日目までの経血量が少ない方は、何日目のものでもかまいません。

※　月経血は、できれば“かたまり”を採取して下さい。かたまりの無い方は、液状のものでかまいません。

月経血がかたまり様の場合は、以下のようにしますと採取できます。
１．生理用品より、スプーンを用いてかたまりを取り、採取容器（50 mlチューブ、ピンク色の培養液が入っています。）にいれます。
２．しっかりと蓋をし、チューブの入っていたビニール袋にいれ、ファスナーをしっかりと閉じて下さい。

月経血がさらさらの場合は、以下のようにしますと採取できます。
１．ディッシュまたは紙コップ（使いやすい方、どちらを使っていただいても結構です。）を手で持っていただき、トイレに座った状態で月経血が流れ落ちてくる場所にディッシュまたは紙コップを当て、月経血を受けます。
２．ディッシュまたは紙コップより、採取容器（50 mlチューブ、ピンク色の培養液が入っています）に月経血を移します。
３．しっかりと蓋をし、チューブの入っていたビニール袋にいれ、ファスナーをしっかり閉じて下さい。

注意事項

　　
・月経血は、できれば“かたまり”のものを採取して下さい。かたまりの無い　　方は、液状のものでかまいません。

・月経血は、できれば初日～３日目の間に採取して下さい。３日目までの経血量が少ない方は、何日目のものでもかまいません。

・月経血は一回に採れた分全てをチューブに入れて下さい。（少なくてもかまいませんが、多い方が助かります。）
　　
・採取容器は２本入っていますが、一回の生理周期に１本採取していただければ結構です（１本は予備として入れてあります）。２本採取できそうであれば、２本採取していただいてもかまいません。

・検体を採取したら、できるだけ早く返送して下さい。

・容器は常温で結構です。検体を採取した後も常温で結構です（冷蔵する必要はありません）。

移植細胞に対する処理後の、品質管理

心筋への細胞移植に当たり、必要な品質管理他のメモ書き

　細胞に対して処理をした場合、その細胞に対しても品質管理が必要となる。
　　　例）　増殖能、細胞死、コロニー形成能（CFU-F)、細胞表面。

　分化細胞は、幹細胞？分化細胞といえども、中には、幹細胞活性を有するものが入っている可能性があるので、ヒト幹指針の対象。逆に幹細胞活性がないものに関しては幹細胞指針の対象外。

　26例で一例は染色体異常があった。転座があれば少々心配。

　コラゲナーゼ（ロッシュ）の代わりとしての、コラゲナーゼ（サルバ社）がいいんじゃないか。分散力は高く、細胞障害性が低い。ワーシントン社のが最終的に一番安全なのではないか。

　審査期間が長い。concrete decisionが得にくい。下部委員会が必要ではないか。

自分の研究生活での大きなゴールって何だろう 目標 月経血 筋ジストロフィー

中期目標（より正確に言えば人生の最終目標）
１．ES細胞を用いた臨床研究
　　薬事法：　難病（Orphan disease）
　　医療法：　大やけど

２．再生医療
　　先天性色素性巨大母斑
　　角膜混濁
　　筋ジストロフィー（PAE, 月経血）
　　肋骨（PLGA, 弾性・硝子軟骨細胞）

３．細胞
　　骨髄間質細胞
　　月経血
　　PAE
　　iCS cell


　だいたいこんな質問をすること自体問題なのだろうが、小さな目標はたくさんある。あまり大きな研究目標を持つと、固定観念になるので避けていたのだが年齢から考えるとそろそろ研究生活のゴールというか証明したい作業仮説を明確にしたい。

　小さな仮説は多くあるので、手帳はそれで埋まっているけど、研究生活をかけたものもほしくなってきた。よくばりだ。年齢からの逆算でそうなってしまう。

　新たな仮説やモデルなんて出てきゃしないから、今持っているモデルで一番気に入っているやつを最終ゴールとしよう。どれにしようか。時間があるときに決めよう。

研究室の仲間と話しました。「月経血の細胞による筋ディストロフィー治療」と「骨髄間質細胞」がいいんじゃないって。やっぱり、卒業してすぐに始めた研究を一生できるっていうのは、幸せなんだろうけど、なんだか他のメジャーなお仕事ができないから次善でがまんしているっていう風もある。本当なんだろうけど。「骨髄間質細胞のアイデンティティー」研究がいいんだけど、終わっているところもある。

EWS-Oct4/3

がん研究所にて、骨軟部腫瘍にキメラ遺伝子EWS-Oct4/3があることが発見された。また、その骨軟部腫瘍から、細胞株が樹立された。何年か前の病理学会での発表を見た同僚が私にそのことを報告してくれた。その頃、間葉系細胞からヒト胚性幹細胞を作成しようと思っていたので、この腫瘍は胚性幹細胞の特徴を持っているのではないかと予想した。もらった細胞を調べてみるとそんなことはなく、ただの肉腫であった。結構がっかりしたのだが、報告しなきゃといろいろなことを試みた。キメラ遺伝子以外のゲノム異常はないのか。腫瘍細胞自体は胚性幹細胞の性質はもっていないが、EWS-Oct4/3は強いOct4/3活性を有しており、間葉系細胞を初期化できるのではないか。いろいろな可能性を探り、EWS-Oct4/3を間葉系細胞に導入したが結局、胚性幹細胞はできなかった。今で言うiPS細胞を作成しようとしていたわけであるが、当時は山中氏の発表もなく、何か雲をつかむような話であった。実際、やっている本人も半信半疑であるから、うまくいくわけがなかったのだろう。山中氏のような信念がなくては、iPS細胞はできないのであろう。

　しかし、話はまだつづき、なんとEWS-Oct4/3は信念があったとしても全くiPS細胞はできなかっただろう。山中四因子のうち、Oct4/3の代わりにEWS-Oct4/3を利用しても全くiPS細胞はできなかった。もちろん、同じ細胞を用いてOct4/3を含む山中４因子でiPS細胞はたくさんできてきたので、結局、EWS-Oct4/3は強いOct4/3活性どころか全くOct4/3としても転写活性を有していないことになる。この内容は、現在Exp Cell Resに印刷中であり、今年度中に論文が出版されることになる。このEWS-Oct4/3に、単にがん遺伝子としての機能しかないことは韓国のグループがOncogeneに発表している。Oct4/3はかなりの部分の遺伝子があるのに、EWSがくっついただけで「がん遺伝子」に変身してしまうとは悲しい。というわけで、EWS-Oct4/3の研究はこれで終わりとなります。昔からEwing肉腫の研究をしていたので、この手のキメラ遺伝子研究は楽しかったが、結果として論文にはなったものの、「間葉系細胞から胚性幹細胞へ」ということはならなかったわけで、繰り返すが悲しい。

哺乳類の単為発生に関するブログ

http://blogs.yahoo.co.jp/omkjouzva3653/37385718.html

今日の講演で同じような話を聞いてきました。胎生期のエピジェネティクス制御にかかるお話でした。

Examples showing how important epigenetics is.

ロバ　　　ラバ
三毛猫
朝顔の縞模様

胎盤の進化　（石野先生のお仕事）
　有袋類　（カンガルー）　胎盤あり　　インプリンティングあり
　カモノハシ　（ほ乳類だけど卵あり）　インプリンティングなし

子宮内胎児発育不全

乏精子症

反復性胞状奇胎

習慣流産（モデルマウス）

インプリンティングにかかる遺伝子は、クラスターになっている。染色体上で３０カ所にクラスターしている。

IUGR Epi-genotype versus phenotype
Miscarriage-derived specimens have a unique epigenotype (DMR region identified by Prof Ito: e.g., syncytin, H19).

Abortion-derived specimens serve a control for this.

Illumina-Infinium analysis revealed that there is a big difference in epigenotype between plancenta and peripheral blood.

塞翁が馬、いや浦島太郎か。

　ヒト細胞の初期培養では、PDGF, bFGF等で増殖を亢進させることにより、Rb/ink4a伝達経路が刺激され、最終的にpremature senescence（細胞老化）が促進されてしまう。いいこともあれば、悪いこともおきる。増殖が刺激されるが、寿命に変化を起こさせない方法として、フィーダー細胞を用いることが報告されているが、液性因子を用いることで解決できないかな。

　この現象はヒト細胞の培養における現象であるが、「人間万事、塞翁が馬」というのと似ているように思えるし、楽しい思いをして寿命が加速した「浦島太郎」の話にも似ているような気がする。もし、この内容を英語で総説を書く機会を与えられたら是非、この二つの話とともに書こう。

Takahashi, H., et al., J Cell Physiol, 2009