Manami

Implantation of Kiy-Hep cells

Cell

1.Hep2044 (Yu)---Tendon or myocytes, but no hepatocytes.

2.Hep2020---will be sacrified on Nov 22.

3.Hep2004---No phenotypes (no hepatocytes) by four replicates or injection.

4.Hep2013 (Yu)---will be sacrified on Nov 22.

5.Hep2017---will be sacrified on Nov 22.

6.Hep2018---injection done.

7.Hep2040---injection done.

8. Hep2045---injection done.

9. Hep2022D---injection done.

10.Hep2023D---injection done.

11.Hep2039D---injection done.

Experiment

1. Implantation of the cells into subcapsular region.

2. Myocytic differentiation

3. Possibly tendon-like morphology

Plan:

1. Gene chip analysis of Kiy-Hep cells

2. Immunohistochemistry

A. Desmin

B. Myoglobin

C. Tendon-related molecules

D. Vimentin

F. Myosin

G. gamma-actin

3. Deposition of the cells to NIHS

4. Review of papers from Cui (myocyte), Asahara lab and Hiraki lab (tendon).

5.Integration of the transgenes, e.g. TERT.

6.qRT-PCR

7.Phase contrast photomicrograph.

8.Cell information from Tohru.

9. Injection of the cells into dmd mice.

10.Karyotype.

11.Flowcytometry.

12.Myogenic differentiation and tendon differentiation in vitro.

13.Immunohistochemistry.

14.Subcutaneous implantation of a large number of the cells.

肝細胞名	状態	細胞数(×10e6)	Passage	チューブ本数	年齢	性別	疾患名等	肝臓重量	分離方法
Hep2004	Rec-Hepatocyte	6.0	P1	4			胆道閉鎖症に対する生体肝移植		Collagenase灌流
Hep2004	Rec-Mix	14.2	P1	4			胆道閉鎖症に対する生体肝移植		Collagenase灌流
Hep2005	Rec-PPT	11.0	P2PD5	2	７か月	女	胆道閉鎖症に対する生体肝移植		Collagenase灌流
Hep2006	Rec-PPT	3.5	P1PD1	1	2歳8ヶ月	女	胆道閉鎖症に対する生体肝移植		Collagenase灌流
Hep2006	Rec-SUP	5.4	P1PD1	1	2歳8ヶ月	女	胆道閉鎖症に対する生体肝移植		Collagenase灌流
Hep2007	Rec-SUP	1.3	P1PD2	2	1歳1ヶ月	女	胆道閉鎖症に対する生体肝移植	全肝重量296g。肝断片重量76g。	Collagenase灌流
Hep2009	Rec-PPT	10.0	P1PD2	1	5ヶ月	女	胆道閉鎖症	全体199g、検体26g	Collagenase灌流
Hep2009	Rec-SUP	3.5	P1PD2	1	5ヶ月	女	胆道閉鎖症	全体199g、検体26g	Collagenase灌流
Hep2009	Don-SUP	4.7	P1PD1	1	31歳	男		84g+54g（84gを分離、54gは凍結）	Collagenase灌流
Hep2012	Rec-SUP2	2.4	Fresh	1	8ヶ月	女	胆道閉鎖症に対する生体肝移植		Collagenase灌流
Hep2013	Rec-PPT	5.0	Fresh	1	3歳10ヶ月	女	胆道閉鎖症に対する生体肝移植	総肝重量478g 肝断片重量103g	Collagenase灌流
Hep2013	Rec-SUP1	3.2	Fresh	1	3歳10ヶ月	女	胆道閉鎖症に対する生体肝移植	総肝重量478g 肝断片重量103g	Collagenase灌流
Hep2013	Rec-SUP2	2.3	Fresh	1	3歳10ヶ月	女	胆道閉鎖症に対する生体肝移植	総肝重量478g 肝断片重量103g	Collagenase灌流
Hep2013	Rec-SUP3	6.2	Fresh	2	3歳10ヶ月	女	胆道閉鎖症に対する生体肝移植	総肝重量478g 肝断片重量103g	Collagenase灌流
Hep2014	Rec-PPT	2.2	Fresh	1	2歳1ヶ月	女	プロピオン酸血症に対する生体肝移植	総肝重量644g 肝断片重量131g	Collagenase灌流。組織量多く、酵素処理でほぐれやすかった。よって細胞懸濁液は1人当たり95mL供与された
Hep2014	Rec-SUP1	9.7	Fresh	2	2歳1ヶ月	女	プロピオン酸血症に対する生体肝移植	総肝重量644g 肝断片重量131g	Collagenase灌流。組織量多く、酵素処理でほぐれやすかった。よって細胞懸濁液は1人当たり95mL供与された
Hep2014	Rec-SUP2	2.6	Fresh	1	2歳1ヶ月	女	プロピオン酸血症に対する生体肝移植	総肝重量644g 肝断片重量131g	Collagenase灌流。組織量多く、酵素処理でほぐれやすかった。よって細胞懸濁液は1人当たり95mL供与された
Hep2014	Rec-SUP3	4.0	Fresh	1	2歳1ヶ月	女	プロピオン酸血症に対する生体肝移植	総肝重量644g 肝断片重量131g	Collagenase灌流。組織量多く、酵素処理でほぐれやすかった。よって細胞懸濁液は1人当たり95mL供与された
Hep2015	Rec-SUP2	25.0	Fresh	1	1歳1ヶ月	女	胆道閉鎖症に対する生体肝移植	全393g 内 63g使用	Collagenase灌流
Hep2015	Rec-SUP3	11.0	Fresh	1	1歳1ヶ月	女	胆道閉鎖症に対する生体肝移植	全393g 内 63g使用	Collagenase灌流
Hep2015	Don-SUP3	20.0	Fresh	1	40歳	男
Hep2017	Rec-SUP1	31.0	Fresh	1	1歳3ヶ月	女	糖原病Ib型に対する生体肝移植	全肝重量　828g。肝断片重量　記載漏れ	Collagenase灌流。硬変少し。かなり重度な脂肪肝。ガーゼで１回ろ過。Clude細胞液50mLをもらった。
Hep2017	Rec-SUP2	31.0	Fresh	1	1歳3ヶ月	女	糖原病Ib型に対する生体肝移植	全肝重量　828g。肝断片重量　記載漏れ	Collagenase灌流。硬変少し。かなり重度な脂肪肝。ガーゼで１回ろ過。Clude細胞液50mLをもらった。
Hep2018	Rec-SUP2+SUP3	2.2	Fresh	1	4歳	女	胆道閉鎖症に対する生体肝移植	全肝重量　450g。肝断片（左葉）重量　26g。	Collagenase灌流。ガーゼで１回ろ過。Clude細胞液45mLをもらった。ビリルビンの蓄積はない。見た目は正常な色だが、繊維化が進行していた。実質細胞が採取しづらい
Hep2020	Rec-SUP1	76.0	Fresh	2	6歳	男	先天性肝線維症に対する生体肝移植	全肝重量　804g、検体111g	Collagenase灌流。ガーゼで１回ろ過。メッシュで１回ろ過。Clude細胞液65mLをもらった。繊維化が進行していたため組織が硬かったが、コラゲナーゼ処理後、組織はかなり柔らかくなった。
Hep2022	Don-SUP2	29.0	Fresh	1	26歳	男		67.5g	Collagenase灌流。ガーゼで１回ろ過。Clude細胞液約100mLをもらった。
Hep2022	Don-SUP3	4.5	Fresh	1	26歳	男		67.5g	Collagenase灌流。ガーゼで１回ろ過。Clude細胞液約100mLをもらった。
Hep2023	Don-SUP1	73.0	Fresh	1	32歳	男			Collagenase灌流.正常肝組織　白色脂肪が多い。全体的に白濁。黄色い脂肪はない。予想外に細胞が得られなかった。１回目の遠心でDNA塊のようなドローっとしたものが沈殿したので、沈殿塊を除去した細胞懸濁液を再度４０um穴セルストレーナーでろ過してから使用した。
Hep2039	Don-SUP1	45.0	Fresh	1	36歳	女	胆道閉鎖症（BA）に対する生体肝移植。ドナー肝。		Collagenase灌流
Hep1039	Don-SUP2	11.5	Fresh	1	36歳	女	胆道閉鎖症（BA）に対する生体肝移植。ドナー肝。		Collagenase灌流
Hep2040	Rec-SUP1	100.0	Fresh	4	7ヶ月	男	肝内胆汁うっ滞症（アラジール症候群疑い）に対する生体肝移植。レシピエント肝。　酵素処理後も組織は硬く、細胞懸濁液も組織もビリルビンが大量に蓄積していた。とても緑色。	全肝重量489g、肝断片重量70ｇ。	Collagenase灌流
Hep2040	Rec-SUP2	41.0	Fresh	2	7ヶ月	男	肝内胆汁うっ滞症（アラジール症候群疑い）に対する生体肝移植。レシピエント肝。　酵素処理後も組織は硬く、細胞懸濁液も組織もビリルビンが大量に蓄積していた。とても緑色。	全肝重量489g、肝断片重量70ｇ。	Collagenase灌流
Hep2040	Rec-SUP3	17.0	Fresh	1	7ヶ月	男	肝内胆汁うっ滞症（アラジール症候群疑い）に対する生体肝移植。レシピエント肝。　酵素処理後も組織は硬く、細胞懸濁液も組織もビリルビンが大量に蓄積していた。とても緑色。	全肝重量489g、肝断片重量70ｇ。	Collagenase灌流
Hep2041	Rec-PPT	0.3	Fresh	1	2歳7ヶ月	女	MMA（メチルマロン酸血症）に対する生体肝移植	全肝重量1412g、検体断片重量94g	Collagenase灌流
Hep2044	Rec-PPT	12.0	Fresh	4	5ヶ月	女	原因不明肝硬変（胆道閉鎖症の疑い強い、病理診断にて確定の見込み）	全肝重量314ｇ、肝断片重量41ｇ。	Collagenase灌流
Hep2045	Rec-SUP1	64.0	Fresh	2	15歳	男	胆道閉鎖症（BA）に対する生体肝移植	全肝重量 964g、肝断片重量　141g。	Collagenase灌流
Hep2045	Rec-SUP2+3	13.7	Fresh	1	15歳	男	胆道閉鎖症（BA）に対する生体肝移植	全肝重量 964g、肝断片重量　141g。	Collagenase灌流
Hep2045	Rec-PPT	0.1	Fresh	1	15歳	男	胆道閉鎖症（BA）に対する生体肝移植	全肝重量 964g、肝断片重量　141g。	Collagenase灌流
肝臓はコラゲナーゼ酵素処理後低速遠心分離してPPT(pellette)とSUP(supernatant)に分けて凍結保存しました。
生体肝移植時のレシピエント肝をRec、ドナー肝をDonとしてチューブに表記しています。よってHep2009とHep2015に関しましてはドナー細胞とレシピエント細胞の２種類存在します。