作り方
12の異なる遺伝子で作成した。山中4因子じゃなくてもできる。
12の異なる遺伝子で作成した。山中4因子じゃなくてもできる。
遺伝子を導入する方法は、
1.Retrovirus
2.Plasmid
3.Adenovirus
4.Protein
5.mRNA
1.Retrovirus
2.Plasmid
3.Adenovirus
4.Protein
5.mRNA
腫瘍形成能(安全性)は二通り。
1.Transgeneの活性化による癌。
2.奇形腫。
1.Transgeneの活性化による癌。
2.奇形腫。
80wから100wで、Retro-4F, Plasmid-4F, Plasmid(integrated)-4F, Retro-3F, REtro(excision)-3Fの順で癌ができやすい。
Neurosphereにしても、Nanog-EGFPでところどころ光る細胞が散見される。1.ちょっとだけ、未分化な細胞が混じる(Teratoma), 2.全部 悪い。 サザンブロットで見ても、クローンは一定なので、培養中の問題(たとえ培養条件が完璧でもそうなる)。Epigenetic異常と考えられる。 ESは安全だが、iPSにはSafe iPSとunsafe iPS cloneがある。
これらは、Origin, 樹立方法によって決まる。
Episomal vector: p53 shRNA-Oct4/3 with ori-EBNA-1, c-myc-lin28, Sox2-Klf4. Episomal vector (plasmid)を使用するといくつかのクローンはクロマチンにインテグレートされていない。
Heterogeneity of iPS during cultivation is more dangerous than retroviral insertion. Transgene-freeが安全という訳でもない。数パーセントはEpigeneticがもどりきっていない。
すべての日本人をカバーするには50種のHLAタイプを持った細胞で充分。2例で、3ローカスがホモになっている細胞がある。
基金の重要性。
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